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實(shí)驗(yàn)室ELISA封閉劑特性介紹
點(diǎn)擊次數(shù):269 更新時(shí)間:2024-04-16

   酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù),是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理,對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法。封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中,通常使用封閉劑來減少非特異性結(jié)合。常用的封閉劑有脫脂奶粉,BSA,血清以及 Fab 片段單鏈二抗等。根據(jù)不同的平臺(tái)選擇相應(yīng)的封閉劑。

1、脫脂奶粉

作用原理:脫脂奶粉含有多種蛋白,可以封閉未吸附蛋白的固相載體(WB 膜、ELISA 板等)位點(diǎn),減少抗體與之結(jié)合的概率,避免非特異性結(jié)合帶來的高背景。

優(yōu)點(diǎn):價(jià)格便宜,因含多種不同分子量的蛋白,故封閉起來更全面。

缺點(diǎn):成分復(fù)雜,適用范圍窄。不適用于生物素和堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體系統(tǒng)。且封閉后的載體不易長(zhǎng)期保存,因此在試劑盒的生產(chǎn)中較少應(yīng)用。

2、牛血清白蛋白BSA

作用原理:同脫脂奶粉,封閉未吸附蛋白的固相載體位點(diǎn)。

優(yōu)點(diǎn):成分單一,適用于 ELISA 實(shí)驗(yàn),生物素、堿性磷酸酶系統(tǒng)的免疫學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)或者其他對(duì)特異性要求較高的實(shí)驗(yàn)。

缺點(diǎn):大部分 BSA 中有少量的抗體殘留,會(huì)導(dǎo)致抗原/抗體之間的交叉反應(yīng),造成一定背景。

3、動(dòng)物血清

作用原理:

1、待檢樣本會(huì)有些與蛋白非特異性結(jié)合的物質(zhì),從而導(dǎo)致背景過高,因此可以用血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合,從這點(diǎn)看,血清和 BSA 沒有明顯區(qū)別;

2、待檢樣本中可能會(huì)有 Fc 受體,可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合,而封閉血清中有抗體,因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本 Fc 受體之間結(jié)合。BSA 則無法封閉 Fc 受體。

優(yōu)點(diǎn):因?yàn)檠蹇梢苑忾] Fc 受體及減少抗體間的非特異性結(jié)合,故在免疫組化、免疫熒光實(shí)驗(yàn)中有廣泛應(yīng)用。

缺點(diǎn):某些封閉血清中可能含有疊氮鈉,因此不適用于 HRP 酶標(biāo)的檢測(cè)體系。

4、Fab 片段單鏈二抗

作用原理:由于二價(jià)的抗體(全 IgG 或 F(ab’)2 片段)有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn),不能用來封閉。而 Fab 片段單鏈二抗只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn),因此可全封閉免疫球蛋白。

應(yīng)用:在 IHC 或 IF 雙標(biāo)/多標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,封閉樣本表面的免疫球蛋白,封閉組織切片或細(xì)胞表面的內(nèi)源性免疫球蛋白,并可解決兩個(gè)一抗來自同一種屬的麻煩。

5、無蛋白封閉劑---新型高效封閉劑

Blocker 無蛋白封閉劑,該封閉劑是通過化學(xué)合成高親水性化合物,不存在生物封閉劑所擔(dān)心的生物安全性、質(zhì)量、批間差等問題。

主要特點(diǎn):

1)與微球表面活化的羧基偶聯(lián)形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵

2)純化學(xué)合成,批間差小,純度高

3)空間結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,更充分的封閉微球表面,降低微球非特異性吸附,減少基質(zhì)干擾

4)提高試劑靈敏度

5)含大量親水基團(tuán),有利于提高試劑穩(wěn)定性

應(yīng)用領(lǐng)域:乳膠免疫比濁試劑/ 化學(xué)發(fā)光試劑 ,代替 BSA 作為封閉劑或與 BSA 聯(lián)合封閉。

6、免疫試劑穩(wěn)定液

免疫試劑穩(wěn)定液主要用于免疫分析檢測(cè)試劑/抗原/抗體/蛋白的保存.  該產(chǎn)品屬于即用型,無需稀釋,使用簡(jiǎn)單方便,將待保存物質(zhì)溶于穩(wěn)定液中后置于冰箱即可。免疫試劑穩(wěn)定   液有利于維持蛋白的三維結(jié)構(gòu),保持蛋白的生物活性,可延長(zhǎng)免疫分析試劑及蛋白的使用期限,確保產(chǎn)品的性能。

應(yīng)用領(lǐng)域:

1)免疫分析試劑保存, 如免疫比濁檢測(cè)試劑/化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑

2)蛋白質(zhì)保存,如抗原/抗體/酶類等