RT-PCR試劑盒的使用方法及使用注意事項(xiàng)介紹
點(diǎn)擊次數(shù)：658 更新時(shí)間：2020-07-09
RT-PCR試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被樣本抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。
RT-PCR試劑盒的使用首先應(yīng)平衡至室溫（20-25°C ）再試驗(yàn)（ 取出所需反應(yīng)板）
1. 加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品、血清標(biāo)本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
2. 每孔加入100ul酶聯(lián)物，輕輕混勻30秒(重要)，室溫60分鐘。
3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用蒸餾水或者洗滌液（普通洗滌液，自配）洗滌反應(yīng)板，并去除
水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；這樣反復(fù)洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。
5. 每孔加入50ul終止液。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD值。
以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)血清樣品的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
下面要為您介紹的是RT-PCR試劑盒的注意事項(xiàng)：
1、若顯色過淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)。
2、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3、凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。
4、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
5、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測(cè)。
6、標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
7、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
8、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以代測(cè)樣本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。
